pmedpharmФармация и фармакологияPharmacy & Pharmacology2307-92662413-2241Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute - branch of Volgograd State Medical Univer10.19163/2307-9266-2022-10-5-472-482pmedpharm-1198Research ArticleФАРМАКОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯPHARMACOLOGY AND CLINICAL PHARMACOLOGYГЕМОСТИМУЛИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА КОНЪЮГАТОВ ГРАНУЛОЦИТАРНО-МАКРОФАГАЛЬНОГО КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮЩЕГО ФАКТОРА С АЛЕНДРОНОВОЙ КИСЛОТОЙHEMOSTIMULATING PROPERTIES OF THE CONJUGATES OF GRANULOCYTE-MACROPHAGE COLONY STIMULATING FACTOR WITH ALENDRONIC ACIDhttps://orcid.org/0000-0002-1078-7033ШиминаГ. Г.ShiminaG. G.

научный сотрудник отдела биологических исследований 

633004, Россия, г. Бердск, ул. Химзаводская, д. 9 

Researcher of the Department of Biological Research

9, Khimzavodskaya St., Berdsk, Russia, 633004

shimina_gg@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-3761-7798БатеневаА. В.BatenevaA. V.

научный сотрудник отдела биологических исследований 

633004, Россия, г. Бердск, ул. Химзаводская, д. 9 

Researcher of the Department of Biological Research

9, Khimzavodskaya St., Berdsk, Russia, 633004

bateneva_av@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-1277-6258ЦыпленковаЕ. С.TsyplenkovaE. S.

младший научный сотрудник отдела биологических исследований

633004, Россия, г. Бердск, ул. Химзаводская, д. 9 

Junior Researcher, Department of Biological Research

9, Khimzavodskaya St., Berdsk, Russia, 633004

tsyplenkova_es@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-7441-333XГамалейС. Г.GamaleyS. G.

заведующий отделом биологических исследований

633004, Россия, г. Бердск, ул. Химзаводская, д. 9 

Head of the Department of Biological Research

9, Khimzavodskaya St., Berdsk, Russia, 633004

gamaley_sg@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0001-9006-8313ЕсинаТ. И.EsinaT. I.

младший научный сотрудник отдела разработки технологий и пилотного производства биопрепаратов 

633004, Россия, г. Бердск, ул. Химзаводская, д. 9 

Junior Researcher at the Department of Technology Development and Pilot Production of Biological Products

9, Khimzavodskaya St., Berdsk, Russia, 633004

esina_ti@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5028-5647ВолосниковаЕ. А.VolosnikovaE. A.

кандидат биологических наук, заведующий лабораторией получения и анализа биосубстанций отдела разработки технологий и пилотного производства биопрепаратов 

633004, Россия, г. Бердск, ул. Химзаводская, д. 9 

Candidate of Sciences (Biology), Head of the Laboratory for Obtaining and Analyzing Biosubstances of the Department for Technology Development and Pilot Production of Biological Products

9, Khimzavodskaya St., Berdsk, Russia, 633004

volosnikova_ea@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5026-1602ДаниленкоЕ. Д.DanilenkoE. D.

кандидат биологических наук, директор ИМБТ ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора

633004, Россия, г. Бердск, ул. Химзаводская, д. 9 

Candidate of Sciences (Biology), Director of the Medical Biotechnology Institute

9, Khimzavodskaya St., Berdsk, Russia, 633004

danilenko_ed@vector.nsc.ruИнститут медицинской биотехнологии Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человекаРоссияInstitute of Medical Biotechnology of State Research Center of Virology and Biotechnology “VECTOR”, Federal Service for the Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Well-beingRussian Federation202215122022105472482Copyright © Шимина Г.Г., Батенева А.В., Цыпленкова Е.С., Гамалей С.Г., Есина Т.И., Волосникова Е.А., Даниленко Е.Д., 20222022Шимина Г.Г., Батенева А.В., Цыпленкова Е.С., Гамалей С.Г., Есина Т.И., Волосникова Е.А., Даниленко Е.Д.Shimina G.G., Bateneva A.V., Tsyplenkova E.S., Gamaley S.G., Esina T.I., Volosnikova E.A., Danilenko E.D.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmpharm.ru/jour/article/view/1198Цель

Цель. Оценка гемостимулирующей активности конъюгатов рекомбинантного гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора человека (рчГМ-КСФ) с алендроновой кислотой (АЛН) на модели цитостатической миелосупрессии и динамики накопления рчГМ-КСФ в составе конъюгата в костной ткани и костном мозге мышей.

Материалы и методы

Материалы и методы. В работе использовали конъюгаты, полученные методом твердофазного синтеза с помощью 1-этил-3-[3-диметиламинопропил]карбодиимида или реакции периодатного окисления. Гемостимулирующую активность оценивали на модели цитостатической миелосупрессии, вызванной введением мышам СВА/Calaс циклофосфана. Препараты рчГМ-КСФ вводили подкожно в течение 4–5 дней в дозе 90 мкг/кг. По окончании курса инъекций в образцах крови подсчитывали общее количество лейкоцитов, сегментоядерных нейтрофилов, в образцах костного мозга – общее число кариоцитов. Оценку распределения препаратов рчГМ-КСФ по тканям проводили на аутбредных мышах CD-1 после однократного внутривенного введения в эффективной дозе. Содержание рчГМ-КСФ в крови, ткани бедренной кости и костном мозге определяли иммуноферментным методом.

Результаты

Результаты. Показано, что конъюгаты рчГМ-КСФ с АЛН сохраняли присущую исходному белку способность повышать число лейкоцитов, сегментоядерных нейтрофилов крови и кариоцитов костного мозга. Стимуляция продукции нейтрофилов под действием конъюгатов наблюдалась в более ранние сроки, чем в случае рчГМ-КСФ. Увеличение общего числа клеток костного мозга после введения всех трех конъюгатов было более выраженным по сравнению с исходным белком (на 34%). Повышенный гемостимулирующий эффект конъюгата AEG сопровождался более интенсивным накоплением рчГМ-КСФ в костной ткани и костном мозге мышей. Введенный в состав конъюгата рчГМ-КСФ обнаруживался в костной ткани в течение 24 ч и более длительно циркулировал в кровеносном русле по сравнению с исходным белком.

Заключение

Заключение. Полученные данные позволяют сделать вывод о перспективности дальнейших работ по созданию эффективных гемостимулирующих препаратов на основе конъюгатов рчГМ-КСФ с АЛН.

The aim of the work is to evaluate the hemostimulating activity of recombinant human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (rhGM-CSF) conjugates with alendronic acid (ALN) in the model of cytostatic myelosuppression and the dynamics of rhGM-CSF accumulation as a part of the conjugate in the bone tissue and bone marrow of mice.

Materials and methods

Materials and methods. The conjugates obtained by a solid-phase synthesis using 1-ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide or periodate oxidation, were used. A hemostimulating activity was evaluated in a model of a cytostatic myelosuppression induced by the administration of cyclophosphamide to CBA/Calac mice. RhGM-CSF preparations were injected subcutaneously for 4-5 days at the dose of 90 µg/kg. After the injections cycle had been completed, the total leukocyte and segmented neutrophil counts were carried out in the blood samples, and the total karyocyte count was carried out in the bone marrow samples.

The tissue distribution of rhGM-CSF preparations was assessed in outbred CD-1 mice after a single intravenous administration at the effective dose. The content of rhGM-CSF in blood, femoral tissue and bone marrow was determined by enzyme immunoassay.

Results

Results. RhGM-CSF conjugates with ALN have been shown to retain the ability of the original protein to increase the number of leukocytes, segmented blood neutrophils, and bone marrow karyocytes under the action of conjugates. The stimulation of the neutrophil production used to be observed at earlier times than in the case of rhGM-CSF. The increase in the total number of bone marrow cells after the introduction of all three conjugates was more pronounced compared to the original protein (by 34%). The increased hemostimulatory effect of the AEG conjugate was accompanied by a more intense accumulation of rhGM-CSF in the bone tissue and bone marrow of mice. The rhGM-CSF introduced into the conjugate was detected in the bone tissue for 24 h and it circulated in the bloodstream for a longer time compared to the original protein.

Conclusion

Conclusion. The data obtained make it possible to conclude that further work on the development of effective hemostimulating drugs based on rhGM-CSF conjugates with ALN, is promising.

рекомбинантный гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор человекаалендроновая кислотаконъюгатгемостимулирующая активностьнакопление в костной ткани и костном мозгеrecombinant human granulocyte-macrophage colony-stimulating factoralendronic acidconjugatehemostimulating activityaccumulation in bone tissue and bone marrowИсследование проведено в рамках работ по выполнению государственного задания ГНЦ ВБ “Вектор” Роспотребнадзора, тема ГЗ-39/21The study was carried out as a part of the work on the state task implementation of the State Research Center of Virology and Biotechnology VEСTOR, subject GZ-39/21ReferencesDygai A.M., Zhdanov V.V., Miroshnichenko L.A., Zyuz’kov G.N., Udut E.V., Simanina E.V., Stavrova L.A., Khrichkova T.Y., Agafonov V.I. Comparison of Specifi c Activity of Granulocytopoiesis Stimulators after Treatment with Cytostatics with Different Mechanisms of Action // Bull. Exp. Biol. Med. – 2013. – Vol. 55. – P. 631–635. DOI: 10.1007/s10517-013-2212-3Dygai AM, Zhdanov VV, Miroshnichenko LA, Zyuz’kov GN, Udut EV, Simanina EV, Stavrova LA, Khrichkova TY, Agafonov VI. Comparison of Specifi c Activity of Granulocytopoiesis Stimulators after Treatment with Cytostatics with Different Mechanisms of Action. Bull Exp Biol Med. 2013;55:631–5. DOI: 10.1007/s10517-013-2212-3Hamilton J.A., Anderson G.P. GM-CSF Biology // Growth Factors. – 2004. – Vol. 22. No. 4. – P. 225–231. DOI: 10.1080/08977190412331279881Hamilton JA, Anderson GP. GM-CSF Biology. Growth Factors. 2004 Dec;22(4):225–31. DOI: 10.1080/08977190412331279881Bhattacharya P., Budnick I., Singh M., Thiruppathi M., Alharshawi K., Elshabrawy H., Holterman M.J., Prabhakar B.S. Dual Role of GM-CSF as a Pro-Inflammatory and a Regulatory Cytokine: Implications for Immune Therapy // J. Interferon Cytokine Res. – 2015. – Vol. 35, No. 8. – P. 585–599. DOI: 10.1089/jir.2014.0149Bhattacharya P, Budnick I, Singh M, Thiruppathi M, Alharshawi K, Elshabrawy H, Holterman MJ, Prabhakar BS. Dual Role of GM-CSF as a Pro-Inflammatory and a Regulatory Cytokine: Implications for Immune Therapy. J Interferon Cytokine Res. 2015 Aug;35(8):585–99. DOI: 10.1089/jir.2014.0149van de Laar L.V, Coffer P.J., Woltman A.M. Regulation of dendritic cell development by GM-CSF: molecular control and implications for immune homeostasis and therapy // Blood. – 2012. – Vol. 119, No. 15. – P. 3383–3393. DOI: 10.1182/blood-2011-11-370130van de Laar L, Coffer PJ, Woltman AM. Regulation of dendritic cell development by GM-CSF: molecular control and implications for immune homeostasis and therapy. Blood. 2012 Apr 12;119(15):3383–93. DOI: 10.1182/blood-2011-11-370130Hübel K., Dale D.C., Liles W.C. Therapeutic Use of Cytokines to Modulate Phagocyte Function for the Treatment of Infectious Diseases: Current Status of Granulocyte Colony-Stimulating Factor, Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor, Macrophage Colony-Stimulating Factor, and Interferon-gamma // J. Infect. Dis. – 2002. – Vol. 185, No. 10. – Р. 1490–1501 DOI: 10.1086/340221Hübel K, Dale DC, Liles WC. Therapeutic use of cytokines to modulate phagocyte function for the treatment of infectious diseases: current status of granulocyte colony-stimulating factor, granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, macrophage colony-stimulating factor, and interferon-gamma. J Infect Dis. 2002 May 15;185(10):1490–501. DOI: 10.1086/340221Steward W.P., Scarffe J.H., Austin R., Bonnem E., Thatcher N., Morgenstern G., Crowther D. Recombinant human granulocyte macrophage colony stimulating factor (rhGM-CSF) given as daily short infusions-a phase I dose-toxicity study // Br. J. Cancer. – 1989. – Vol. 59, No. 1. – Р. 142–145. DOI: 10.1038/bjc.1989.28Steward WP, Scarffe JH, Austin R, Bonnem E, Thatcher N, Morgenstern G, Crowther D. Recombinant human granulocyte macrophage colony stimulating factor (rhGM-CSF) given as daily short infusions--a phase I dose-toxicity study. Br J Cancer. 1989 Jan;59(1):142–5. DOI: 10.1038/bjc.1989.28Morita M., Lamkhioued B., Soussi Gounni A., Aldebert D., Delaporte E., Capron A., Capron M. Induction by interferons of human eosinophil apoptosis and regulation by interleukin-3, granulocyte/macrophagecolony stimulating factor and interleukin-5 // Eur. Cytokine. Netw. – 1996. – Vol. 7, No. 4. – Р.725–732.Morita M, Lamkhioued B, Soussi Gounni A, Aldebert D, Delaporte E, Capron A, Capron M. Induction by interferons of human eosinophil apoptosis and regulation by interleukin-3, granulocyte/macrophage-colony stimulating factor and interleukin-5. Eur Cytokine Netw. 1996 Dec;7(4):725–32.Lieschke G.J., Burgess A.W. Granulocyte colony-stimulating factor and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor // N. Engl. J. Med. – 1992. – Vol. 327, No. 2. – Р. 99–106. DOI: 10.1056/nejm199207093270207Lieschke GJ, Burgess AW. Granulocyte colony-stimulating factor and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (1). N Engl J Med. 1992 Jul 2;327(1):28–35. DOI: 10.1056/NEJM199207023270106Lee J.H., Nan A. Combination drug delivery approaches in metastatic breast cancer // J. Drug. Deliv. USA. –2012. – Vol. 2012. – Art. ID: 915375. DOI: 10.1155/2012/915375Lee JH, Nan A. Combination drug delivery approaches in metastatic breast cancer. J Drug Deliv. 2012;2012:915375. DOI: 10.1155/2012/915375Mu C.F., Shen J., Liang J., Zheng H.S., Xiong Y., Wei Y.H., Li F. Targeted drug delivery for tumor therapy inside the bone marrow // Biomaterials. – 2018. – Vol. 155. – P. 191–202. DOI: 10.1016/j.biomaterials.2017.11.029Mu CF, Shen J, Liang J, Zheng HS, Xiong Y, Wei YH, Li F. Targeted drug delivery for tumor therapy inside the bone marrow. Biomaterials. 2018 Feb;155:191–202. DOI: 10.1016/j.biomaterials.2017.11.029Kamada H., Tsutsumi Y., Yamamoto Y., Kihira T., Kaneda Y., Mu Y., Kodaira H., Tsunoda S., Nakagawa S., Mayumi T. Antitumor activity of tumor necrosis factor-α conjugated with polyvinylpyrrolidone on solid tumors in mice // Cancer Res. – 2000. – Vol. 60, No. 22. – P. 6416–6420.Kamada H, Tsutsumi Y, Yamamoto Y, Kihira T, Kaneda Y, Mu Y, Kodaira H, Tsunoda SI, Nakagawa S, Mayumi T. Antitumor activity of tumor necrosis factor-alpha conjugated with polyvinylpyrrolidone on solid tumors in mice. Cancer Res. 2000 Nov 15;60(22):6416–20.Даниленко Е.Д., Белкина А.О. Использование бисфосфонатов в качестве средств доставки лекарственных препаратов // Биофармацевтический журнал. – 2014. – Т. 6, № 6. – С. 44–53.Danilenko ED, Belkina AO. The use of bisphosphonates as a means of drug delivery. Russian Journal of Biopharmaceuticals. 2014;6(6):44-53. RussianFarrell K.B., Karpeisky A., Thamm D.H., Zinnen S. Bisphosphonate conjugation for bone specific drug targeting // Bone Reports. – 2018. – Vol. 9. – P. 47–60. DOI: 10.1016/j.bonr.2018.06.007Farrell KB, Karpeisky A, Thamm DH, Zinnen S. Bisphosphonate conjugation for bone specific drug targeting. Bone Rep. 2018 Jul 3;9:47-60. DOI: 10.1016/j.bonr.2018.06.007Sedghizadeh P., Sun S., Junka A., Richard E., Sadrerafi K., Mahabady S., Bakhshalian N., Tjokro N., Bartoszewicz M., Oleksy M., Szymczyk P., Lundy M., Neighbors J., Russell R.G., McKenna C., Ebetino F. Design, synthesis, and antimicrobial evaluation of a novel bone-targeting bisphosphonate-ciprofloxacin conjugate for the treatment of osteomyelitis biofilms // J. Med. Chem. – 2017. – Vol. 60, No. 6. – P. 2326–2343. DOI: 10.1021/acs.jmedchem.6b01615Sedghizadeh PP, Sun S, Junka AF, Richard E, Sadrerafi K, Mahabady S, Bakhshalian N, Tjokro N, Bartoszewicz M, Oleksy M, Szymczyk P, Lundy MW, Neighbors JD, Russell RG, McKenna CE, Ebetino FH. Design, Synthesis, and Antimicrobial Evaluation of a Novel Bone-Targeting Bisphosphonate-Ciprofloxacin Conjugate for the Treatment of Osteomyelitis Biofilms. J Med Chem. 2017 Mar 23;60(6):2326–43. DOI: 10.1021/acs.jmedchem.6b01615Kamble S., Varamini P., Müllner M., Pelras T., Rohanizadeh R. Bisphosphonate-functionalized micelles for targeted delivery of curcumin to metastatic bone cancer // Pharm. Dev. Technol. – 2020. – Vol. 25, No. 9. – P. 1118–1126. DOI: 10.1080/10837450.2020.1798458Kamble S, Varamini P, Müllner M, Pelras T, Rohanizadeh R. Bisphosphonate-functionalized micelles for targeted delivery of curcumin to metastatic bone cancer. Pharm Dev Technol. 2020 Nov;25(9):1118–26. DOI: 10.1080/10837450.2020.1798458Yamashita S., Katsumi H., Sakane T., Yamamoto A. Bone-targeting dendrimer for the delivery of methotrexate and treatment of bone metastasis // J. Dru.g Target. – 2018. – Vol. 26, No. 9. – P. 818–828. DOI: 10.1080/1061186x.2018.1434659Yamashita S, Katsumi H, Sakane T, Yamamoto A. Bone-targeting dendrimer for the delivery of methotrexate and treatment of bone metastasis. J Drug Target. 2018 Nov;26(9):818–28. DOI: 10.1080/1061186X.2018.1434659Xie Z., Liu G., Tang P., Sun X., Chen S., Qin A., Zhu P., Zhang J., Fan S. Bone-targeted methotrexate-alendronate conjugate inhibits osteoclastogenesis in vitro and prevents bone loss and inflammation of collagen-induced arthritis in vivo // Drug. Deliv. – 2018. – Vol. 25, No. 1. – P. 187–197. DOI: 10.1080/10717544.2017.1422295Xie Z, Liu G, Tang P, Sun X, Chen S, Qin A, Zhu P, Zhang J, Fan S. Bone-targeted methotrexate-alendronate conjugate inhibits osteoclastogenesis in vitro and prevents bone loss and inflammation of collagen-induced arthritis in vivo. Drug Deliv. 2018 Nov;25(1):187–97. DOI: 10.1080/10717544.2017.1422295Волосникова Е.А., Демин И.Ф., Левагина Г.М., Лебедев Л.Р., Закабунин А.И., Даниленко Е.Д. Cинтез конъюгатов фактора некроза опухоли альфа с алендроновой кислотой // Биоорганическая химия. – 2016. – Т. 42. №6. – С. 704–711. DOI: 10.7868/S0132342316060154Volosnikova EA, Demin IF, Levagina GM, Lebedev LR, Zakabunin AI, Danilenko ED. The Synthesis of Conjugates of TNF-Alpha and Alendronic Acid. Russian Journal of Bioorganic Chemistry. 2016;42(6):704–11. DOI: 10.7868/S0132342316060154Патент РФ № 2609871/06.02.2017. Противоопухолевое средство // Патент № 2015133400. 2016. Бюл. № 4. Закабунин А.И., Даниленко Е.Д., Волосникова Е.А., Левагина Г.М., Демин И.Ф.Zakabunin AI, Danilenko ED, Volosnikova EA, Levagina GM, Demin IF. Antitumor agent. Russian Federation Patent No. 2609871 C. 2017 Feb 06. RussianПатент РФ № 2708556/09.12.2019. Рекомбинантная плазмидная ДНК р280_2GM, кодирующая полипептид со свойствами гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора человека, штамм E.COLI SG 20050/p280_2GM — продуцент полипептида со свойствами гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора человека и способ его получения // Патент № 2018140842. 2016. Бюл. № 34. Гилева И.П., Есина Т.И., Волосникова Е.А., Гогина Я.С., Лебедев Л.Р., Даниленко Е.Д.Gileva IP, Esina TI, Volosnikova EA, Gogina YaS, Lebedev LR, Danilenko ED. Recombinant plasmid DNA p280_2GM coding polypeptide with properties of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor of human, strain Escherichia coli SG 20050/p280_2GM – producer of polypeptide with properties of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor of human and method of obtaining of said polypeptide. Russian Federation Patent No. 2708556. 20198 Dec 09. RussianЕсина Т.И., Волосникова Е.А., Лебедев Л.Р., Кочнева Г.В., Гражданцева А.А. Синтез конъюгатов гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора с алендроновой кислотой и их свойства // Биоорганическая химия. – 2020. – Т. 46, № 3. – С. 1–8. DOI: 10.31857/S0132342320030112Esina TI, Volosnikova EA, Lebedev LR, Kochneva GV, Grazhdantseva. A. A. Study on the Methods for Synthesis of GM-CSF Conjugates with Alendronic Acid. Russian Journal of Bioorganic Chemistry. 2020;46(3):1–8. DOI: 10.31857/S0132342320030112. RussianМамаева С.А., Круппа И.С., Дятлов В.А., Кутергина И.Ю., Рустамов И.Р., Гумникова В.И. Влияние периодатного окисления на молекулярно-массовые характеристики и фракционную неоднородность полисахаридов // Успехи в химии и химической технологии. – 2014. – Т. 28, №3. – С. 45–48.Mamaeva SA, Kruppa IS, Dyatlov VA, Rustamov IR, Gumnikova VI. Influence of periodate oxidation on fractional inhomogeniety and molecular weight of polysacharides. Uspekhi v himii i himicheskoj tekhnologii=Success in Chemistry and Chemical Technology. 2014;28(3): 45–8. RussianЕсина Т.И., Лебедев Л.Р., Волосникова Е.А., Гилева И.П., Гогина Я.С., Терещенко Т.А., Кочнева Г.В., Гражданцева А.А., Даниленко Е.Д. Способ получения рекомбинантного гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора человека // Биотехнология. – 2019. – Т. 35, № 3. – С. 68–73. DOI: 10.21519/0234-2758-2019-35-3-68-73Esina TI, Lebedev LR, Volosnikova EA, Gileva IP, Gogina YaS, Tereshchenko TA, Kochneva GV, Grazhdantseva AA, Danilenko ED. Method for obtaining recombinant human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor. Biotechnology in Russia. 2019;35(3):68–73. DOI: 10.21519/0234-2758-2019-35-3-68-73Патент РФ № 2332667/27.08.2008. Способ оценки гранулоцитопоэзстимулирующей активности фармакологических веществ // Патент № 2006139437/15. 2006. Бюл. № 24. Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., Зюзьков Г.Н., Жданов В.В., Симанина Е.В., Гурьянцева Л.А., Хричкова Т.Ю., Удут Е.В., Ставрова Л.А., Сотникова Н.В.Goldberg ED, Dygai AM, Zyuzkov GN, Zhdanov VV, Simanina EV, Guryantseva LA, Khrichkova TYu, Udut EV, Stavrova LA, Sotnikova NV. Method of granulocytopenia-stimulating effect evaluation for pharmacological substances. Russian Federation Patent No. 2332667. 2008 Aug 27. RussianШимина Г.Г., Батенева А.В., Гамалей С.Г., Есина Т.И., Терещенко Т.Г., Даниленко Е.Д. Исследование гемостимулирующих свойств рекомбинантного гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора человека. // БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. – 2020. – Т. 20, №4. – С. 268–276. DOI: 10.30895/2221-996X-2020-20-4-268-276Shimina GG, Bateneva AV, Gamaley SG, Esina TI, Tereshchenko TG, Danilenko ED. Study on Hemostimulating Properties of Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor. BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2020;20(4):268–76. DOI: 10.30895/2221-996X-2020-20-4-268-276. RussianГржибовский А.М. Анализ количественных данных для двух независимых групп // Экология человека. – 2008. № 2. – С. 54–61.Grzhibovsky AM. Analysis of quantitative data for two independent groups. Human Ecology. 2008;(2):54-61. RussianГржибовский А.М. Анализ трех и более групп количественных данных // Экология человека. – 2008. – № 3. – С. 50–58.Grzhibovsky AM. Analysis of three or more independent groups of quantitative data. Human Ecology. 2008;(3):50-8. RussianNguyen T.D., Pitchaimani A., Aryal S. Engineered nanomedicine with alendronic acid corona improves targeting to osteosarcoma // Sci. Rep. – 2016. – Vol. 6. – Art. ID: 36707. DOI: 10.1038/srep36707Nguyen TD, Pitchaimani A, Aryal S. Engineered Nanomedicine with Alendronic Acid Corona Improves Targeting to Osteosarcoma. Sci Rep. 2016 Nov 8;6:36707. DOI: 10.1038/srep36707Pan H., Sima M., Kopecková P., Wu K., Gao S., Liu J., Wang D., Miller S.C., Kopecek J. Biodistribution and pharmacokinetic studies of bone-targeting N-(2-hydroxypropyl) methacrylamide copolymer-alendronate conjugates // Mol. Pharm. – 2008. – Vol. 5, No. 4. – P. 548–558. DOI: 10.1021/mp800003uPan H, Sima M, Kopecková P, Wu K, Gao S, Liu J, Wang D, Miller SC, Kopecek J. Biodistribution and pharmacokinetic studies of bone-targeting N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide copolymer-alendronate conjugates. Mol Pharm. 2008 Jul-Aug;5(4):548–58. DOI: 10.1021/mp800003uMiller K., Eldar-Boock A., Polyak D., Segal E., Benayoun L., Shaked Y., Satchi-Fainaro R. Antiangiogenic antitumor activity of HPMA copolymer-paclitaxel-alendronate conjugate on breast cancer bone metastasis mouse model // Mol. Pharm. – 2011. – Vol. 8, No. 4. – P. 1052–1062. DOI: 10.1021/mp200083nMiller K, Eldar-Boock A, Polyak D, Segal E, Benayoun L, Shaked Y, Satchi-Fainaro R. Antiangiogenic antitumor activity of HPMA copolymer-paclitaxel-alendronate conjugate on breast cancer bone metastasis mouse model. Mol Pharm. 2011 Aug 1;8(4):1052-62. DOI: 10.1021/mp200083nChen H., Li G., Chi H., Wang D., Tu C., Pan L., Zhu L, Qiu F., Guo F., Zhu X. Alendronate-Conjugated Amphiphilic Hyperbranched Polymer Based on Boltorn H40 and Poly (ethylene glycol) for Bone-Targeted Drug Delivery// Bioconjug. Chem. – 2012, – Vol. 23, No. 9. – P. 1915–1924. DOI: 10.1021/bc3003088Chen H, Li G, Chi H, Wang D, Tu C, Pan L, Zhu L, Qiu F, Guo F, Zhu X. Alendronate-conjugated amphiphilic hyperbranched polymer based on Boltorn H40 and poly(ethylene glycol) for bone-targeted drug delivery. Bioconjug Chem. 2012 Sep 19;23(9):1915–24. DOI: 10.1021/bc3003088’Akyol U., Sipal S., Demirci E., Gungormus M. The influence of low-level laser therapy with alendronate irrigation on healing of bone defects in rats // Lasers Med. Sci. – 2015. – Vol. 30, No. 3. – P. 1141–1146. DOI: 10.1007/s10103-015-1720-yAkyol UK, Sipal S, Demirci E, Gungormus M. The influence of low-level laser therapy with alendronate irrigation on healing of bone defects in rats. Lasers Med Sci. 2015 Apr;30(3):1141–6. DOI: 10.1007/s10103-015-1720-yLin J.H., Duggan D.E., Chen I.W., Ellsworth R.L. Physiological disposition of alendronate, a potent anti-osteolytic bisphosphonate, in laboratory animals // Drug Metab. Dispos. – 1991. – Vol. 19, No. 5. – P. 926−932.Lin JH, Duggan DE, Chen IW, Ellsworth RL. Physiological disposition of alendronate, a potent anti-osteolytic bisphosphonate, in laboratory animals. Drug Metab Dispos. 1991 Sep-Oct;19(5):926–32.Lin J.H., Chen I.W., Duggan D.E. Effects of dose, sex, and age on the disposition of alendronate, a potent antiosteolytic bisphosphonate, in rats // Drug metabolism and disposition: the biological fate of chemicals. – 1992. – Vol. 20, No. 4. – Р. 473−478.Lin JH, Chen IW, Duggan DE. Effects of dose, sex, and age on the disposition of alendronate, a potent antiosteolytic bisphosphonate, in rats. Drug Metab Dispos. 1992 Jul–Aug;20(4):473–8.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.