pmedpharmФармация и фармакологияPharmacy & Pharmacology2307-92662413-2241Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute - branch of Volgograd State Medical Univer10.19163/2307-9266-2016-4-3-68-83pmedpharm-205Research ArticleФАРМАКОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯPHARMACOLOGY AND CLINICAL PHARMACOLOGYИзучение состояния клеточного гомеостаза слизистой оболочки желудка крыс на модели ревматоидного артрита , леченного ибупрофеном и его комбинацией с винборономThe study of cell homeostasis state of the gastric mucosa of rats on model of rheumatoid arthritis , treatment with ibuprofen and its combination with vinboronГладкихФ. В.HladkykhF. V.

врач-интерн отделения скорой и неотложной медицинской помощи Казатинской центральной районной больницы Винницкого областного Совета. Область научных интересов: поиск и изучение новых подходов к улучшению профиля безопасности и повышению эффективности фармакотерапии нестероидными противовоспалительными препаратами

Doctor-intern in the specialty “Medicine of emergency conditions” course of anesthesiology and intensive care Department of Surgery №1 at Vinnitsa National Pirogov Memorial Medical University. Area of expertise: search and study for new approaches to improve safety and increase of pharmacotherapy efficiency with non-steroid anti-inflammatory drugs

fedir.hladkykh@gmail.comСтепанюкН. Г.StepaniukN. H.

доктор медицинских наук, доцент кафедры фармакологии Винницкого национального медицинского университета им. Н.И. Пирогова. Область научных интересов: изучение влияния препаратов с политропными фармакологическими свойствами на фармакокинетику и фармакодинамику нестероидных противовоспалительных препаратов

Doctor of Medical Sciences, Associate Professor of the Department of Pharmacology at Vinnitsa National Pirogov Memorial Medical University. Area of expertise: the study of the effect of drugs with polytropic pharmacological properties on the pharmacokinetics and pharmacodynamics of non-steroidal anti-inflammatory drugs

ВернигородскийС. В.VernihorodskyiS. V.

доктор медицинских наук, профессор кафедры патологической анатомии, судебной медицины и права Винницкого национального медицинского университета им. Н.И. Пирогова. Область научных интересов: изучение морфогенеза метаплазии слизистой оболочки желудка при предраковых состояниях; патоморфологическая характеристика хронического атрофического метапластического гастрита

Doctor of Medicine Sciences, Professor, Professor of the Department of pathological anatomy, forensic medicine and law at Vinnitsa National Pirogov Memorial Medical University. Area of expertise: study for morphogenesis of metaplasia of stomach mucous membrane in precancerous states; patomorphologic characteristic of chronic atrophic metaplastic gastritis

Винницкий национальный медицинский университет им. Н.И. Пирогова, г. Винница, УкраинаРоссияVinnitsa National Pirogov Memorial Medical University,Vinnitsa, UkraineRussian Federation20160309201643(16)6883Copyright © Гладких Ф.В., Степанюк Н.Г., Вернигородский С.В., 20162016Гладких Ф.В., Степанюк Н.Г., Вернигородский С.В.Hladkykh F.V., Stepaniuk N.H., Vernihorodskyi S.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmpharm.ru/jour/article/view/205Актуальность

Актуальность. Известно, что применение нестероидных противовоспалительных препаратов в клинической практике существенно ограничивает риск возникновения побочных эффектов, наибольшую долю среди которых составляет токсическое воздействие на пищеварительную систему. При этом внимание исследователей всё больше привлекает специфический синдром, ассоциированный с приёмом данной группы препаратов – НПВП-гастропатия, морфологическим субстратом которой может выступать некроз эпителиоцитов. Однако, как показали исследования последних лет, некроз – не только не единственная, но даже не главная причина гибели клеток. Чаще чем некроз наблюдается запрограмированная смерть клеток – апоптоз. Кроме того проблема ульцерогенеза тесно связана со способностью эпителия слизистой оболочки желудка к адекватной регенерации. Это обуславливает необходимость поиска путей корекции влияния нестероидных антифлогистиков на процессы апоптоза и пролифератив ную активность эпителиоцитов слизистой оболочки желудка.

 

 

Материалы и методы

Материалы и методы. Иммуногистохимические исследования выполняли на парафиновых срезах с использованием стрептавидин-биотинового метода («DAKO», Дания; LSAB2 Systems, HRP). Демаскировку антигена проводили в цитратном буфере с рН 6,0. В качестве первичных антител применяли мышиные и кроличьи моноклональные антитела. Ядра клеток докрашивали гематоксилином Майера в течение 15-60 сек. Состояние пролиферативной активности эпителиоцитов желудка изучали с помощью мышиных моноклональных антител к ядерному антигену Ki-67 («DAKO», клон MIB-1, Дания), как чувствительного маркера пролиферации методом T. Scholzen. Для характеристики активности процессов апоптоза исследовали экспрессию CPP32 (caspase-3) в слизистой оболочке желудка, используя полуколичественную шкалу оценки интенсивности окраски: 0 (отсутствует) – отсутствие положительной реакции в клетках, 1 (слабая) – до 30% клеток, отреагировали положительно, 2 (умеренная) – 31-60%, 3 (сильная)– 60% и более окрашенных клеток.

Результаты и их обсуждения. Анализ результатов иммуногистохимических исследований экспрессии меток Кі-67 и CPP32 показал, что в основе гастропротективного эффекта винборона при ибупрофен-индуцированной гастропатии у крыс с адъювантным артритом лежит его способность повышать регенеративные свойства желудочного эпителия путём восстановления пролиферативной активности. Кроме того винборон способен подавлять индуцированный ибупрофеном апоптоз эпителиоцитов желудка, что способствует поддержанию клеточного гомеостаза слизистой оболочки желудка.

Introduction

Introduction. The use of NSAIDs in clinical practice is known for a significant reduction of side effects risks, among which the largest share of toxic effects on the digestive system. At the same time, the attention of researchers is increasingly payed to a specific syndrome associated with application of this group of drugs – NSAIDs gastropathy, with necrosis of epithelial cells as a possible morphological substrate. However, as the recent studies have shown, necrosis is not the only, but also is not the main cause of cell death. Apoptosis, the programmed cell death, is observed more often than necrosis. Besides, ulcerogenesis problem is closely linked to the ability of the gastric mucosa epithelium to adequate regeneration. This necessitates a search for the ways to correct the effect of non-steroidal antiphlogistics on the processes of apoptosis and proliferous activity of epithelial cells of the gastric mucosa. 

Materials and methods

Materials and methods. Immunohistochemical studies were performed on paraffin sections using streptavidin-biotin method (“DAKO”, Denmark; LSAB2 Systems, HRP). Antigen unmasking was performed in citrate buffer pH 6.0. Mice`s and rabbit`s monoclonal antibodies were used as the primary antibodies. The cell nuclei were colored with Mayer’s hematoxylin for 15-60 seconds. Condition gastric epithelial proliferative activity was studied using a mouse monoclonal antibody to nuclear antigen Ki-67 (“DAKO”, MIB-1 clone, Denmark) as a sensitive marker of proliferation by T. Scholzen. To characterize the activity of apoptosis the expression of CPP32 (caspase-3) in the gastric mucosa was examined, using semiquantitative rating scale color intensity of 0 (none) – no positive reactions in cells, 1 (weak) – up to 30% of the cells reacted positively 2 (moderate) – 31-60%, and 3 (strong) – 60% more stained cells.

Results and Discussion

Results and Discussion. Analysis of the results of immunohistochemical expression of Ki-67 and CPP32 showed that the basis of gastroprotective effect of vinboron with ibuprofen-induced gastropathy in rats with adjuvant arthritis is its ability to enhance the regenerative properties of the gastric epithelium by restoring the proliferative activity. In addition vinboron is able to inhibit apoptosis induced by ibuprofen epithelial cells of the stomach, which helps to maintain cellular homeostasis of the gastric mucosa.

ибупрофенвинборонпролиферативная активностьапоптоз.ibuprofenvinboronproliferative activityapoptosisReferencesГладких, Ф.В. Сучасні шляхи послаблення ульцерогенності нестероїдних протизапальних засобів: досягнення, невирішені питання та шляхи оптимізації / Ф.В. Гладких, Н.Г. Степанюк // Запорожский медицинский журнал. – 2014. – № 2. – С. 82–86. – Режим доступа: http:// nbuv.gov.ua/UJRN/Zmzh_2014_2_23.Hladkykh F. V., Stepaniuk N. H. Modern ways of easing ulcerating NSAIDs: achievement, outstanding issues and ways to optimize. Zaporozhye Medical Journal. 2014. No. 2. P. 82-86;; http://nbuv.gov.ua/UJRN/Zmzh_2014_2_23.Гладких, Ф. В. Характеристика протизапальної та знеболюючої активності ібупрофену та його комбінації з вінбороном на моделі ад’ювантного артриту у щурів / Ф. В. Гладких, Н. Г. Степанюк // Вісник наукових досліджень. – 2015. – № 2 (79). – С. 108– 111. – Режим доступа: http://nbuv.gov.ua/UJRN/vndt_2015_2_33.Hladkykh F. V., Stepaniuk N. H. Characteristics of the inflammatory and analgesicПавлюк, Г. В. Аналгезуюча дія німесуліду за умови комбінованого застосування з амлодипіном на тлі експериментального ревматоїдного артриту / Г. В. Павлюк, Н. М. Серединська // Матеріали міжнародної конференції «Наука в епоху дисбалансів» 3 частина (25 січня 2016 р.). – Київ, 2016. – С. 120–125.activity of ibuprofen and its combination with the model vinboronom adjuvant arthritis in rats. Journal of Research. 2015. No. 2 (79). P. 108-111; http://nbuv.gov.ua/UJRN/vndt_2015_2_33.Свінцицький А.С. НПЗЗ-гастропатії : сучасний стан проблеми // Кримський терапевтичний журнал. – 2010 – Т. 10, № 2. – С. 280–286.Pavljuk G. V., Seredins’ka N. M. Analgesic effect of nimesulide provided the combined use of amlodipine on the background of experimental rheumatoid arthritis. International Conference “Science in the era imbalances” Part 3. Kyiv, 2016. P. 120–125.Федченко, С. Н. Роль маркеров клеточного обновления (Ki-67) и апоптоза в возникновении и прогрессировании нарушений клеточного гомеостаза эпителиоцитов желудка, ассоциированных с воздействием на организм паров толуола / С.Н. Федченко, Л.О. Галузина // Вісник проблем біології і медицини. – 2011. – Вип. 2.– Т. 2. – С. 272-274.Svіncic’kij A. S. NSAID gastropathy: current state of problem. Crimean therapeutic journal. 2010. Vol. 10, no. 2. P. 280-286.Kroemer, G. Mitochondrial membrane permeabilization in cell death. / G. Kroemer, L. Galluzzi, C. Brenner // Physiological reviews. – 2007. – № 87 (1). – Р. 99–163.Fedchenko S. N., Galuzina L. O. The role of markers of cell renewal (Ki- 67) and apoptosis in the genesis and progression of epithelial cell homeostasis disorders of the stomach, associated with exposure to toluene vapor body. News of problems biology and medicine. 2011. Vol. 2, no. 2. P. 272– 274.Рыболовлев, Ю. Р. Дозирование веществ для млекопитающих по константам биологической активности / Ю. Р. Рыболовлев, Р.С. Рыболовлев // Доклады АН СССР. – 1979. – № 6. – С. 1513–1516.Kroemer G., Galluzzi L., Brenner C. Mitochondrial membrane permeabilization in cell death. Physiological reviews. 2007. No. 87. P. 99–163.Rainsford K. D. Ibuprofen: Pharmacology, Therapeutics and Side Effects: monograph. – Heidelberg: Springer Basel, 2012. – 259 р.Rybolovlev Ju. R., Rybolovlev R. S. Dosing for mammals substances constants biological activity. Reports of the Academy of Sciences of the USS. 1979. No. 6. P. 1513-1516.Каратаев А.Е., Яхно Н.Н., Лазебник Л.Б. и др. Применение нестероидных противовоспалительных препаратов: клинические рекомендации. – М.: ИМА-ПРЕСС, 2009. – 168 с.Rainsford K. D. Ibuprofen: Pharmacology, Therapeutics and Side Effects. Monograph. Heidelberg. Springer Basel, 2012. 259 p.Степанюк, Г. І. Вінборон – лікарський засіб з політропними фармакологічними властивостями: монографія / Г.І. Степанюк, О.О. Пентюк, Р.П. Піскун. – Вінниця: Изд-во «Конти- нент-Прим», 2007. – 243 с.Karateev A. E., Jahno N. N., Lazebnik L. B., Kukushkin M. L., Drozdov V. N., Isakov V. A., Nasonov E. L. The use of nonsteroidal anti-inflammatory drugs. Clinical recommendations. Moscow: «IMA-PRESS», 2009. 168 p.Сергєєв С.В. Фармакотерапевтична ефективність вінборону при експериментальних гепатитах: Автореф. дис. канд. мед. наук. – Киiв, 2002. – 19 с.Stepaniuk H.І., Pentjuk O. O., Pіskun R. P. Vinboron - a drug with polytropic pharmacological properties: monograph. – Vіnnicja: Izdat. «Kontinent-Prim», 2007. 243 p..Доклінічні дослідження лікарських засобів: метод. рекоменд.// За ред. член-кор. АМН України О. В. Стефанова. – Киiв: ВД «Авіцена», 2001. – 527 с.Sergeev S.V. Pharmacological efficacy in experimental hepatitis vinboronu: author. dis. candidate. medical sciences.. Kyiv, 2002. 19 p.Автандилов Г.Г. Основы количественной патологической анатомии. – М.: Медицина, 2002. – 240 с.Preclinical studies of drugs: method. have recommendations; A.V. Stefanov. Kyiv: «Avіcena», 2001. P. 527.Аруин Л. И. Апоптоз при патологических процессах в органах пищеварения // Клиническая медицина. – 2000. – Т. 78, № 1. – С. 5–10.Avtandilov G.G. Fundamentals of quantitative pathological anatomy. Moscow: «Medicina»,, 2002. Р. 240.Scholzen T. et al. The Ki-67 protein interacts with members of the heterochromatin protein 1 (HP1) family: a potential role in the regulation of higher-order chromatin structure // J. Pathol. – 2002. – Vol. 196. – P. 135–144.Aruin L.I. Apoptosis during pathological processes in the digestive organs. Clinical medicine. 2000. Vol. 78, no. 1. P. 5–10.Животова Е. Ю. Участие регуляторных пептидов в поддержании тканевого гомеостаза слизистой оболочки желудка: Автореф. дис. д-ра мед. наук. – Владивосток, 2014. – 39 с.Scholzen T. et al. The Ki-67 protein interacts with members of the heterochromatin protein 1 (HP1) family: a potential role in the regulation of higher-order chromatin structure. J. Pathol, 2002. No. 196. P. 135–144.Осадчук, О. М. Роль маркеров клеточного обновления и апоптоза эпителиоцитов при заболеваниях желудка, ассоциированных с H. Pylori / О. М. Осадчук, Н. Ю. Коган, И. М. Кветной // Вестник ВолГМУ. – 2007. – № 1 (21). – С. 29-33.Zhivotova E. Ju. Participation of regulatory peptides in the maintenance of tissue homeostasis of the gastric mucosa: author. dis. dr. med. sciences: spec. Vladivostok, 2014. P. 39.Cassaro M., Rugge M., Tieppo C. et al. Indefinite for non-invasive neoplasia lesions in gastric intestinal metaplasia: the immunophenotype // J. Clin. Pathol. – 2007. – Vol. 60. – P. 615–621.Osadchuk O. M., Kogan N.Ju., Kvetnoj I.M. The role of markers of cell renewal and apoptosis of epithelial cells in diseases of the stomach, associated with H. Pylori. Bulletin VolGMU. 2007. No. 1 (21). P. 29–33.Cassaro М., Rugge M., Tieppo C. et al.Indefinite for non-invasive neoplasia lesions in gastric intestinal metaplasia : the immunophenotype. J. Clin. Pathol. 2007. Vol. 60. P. 615–621Cassaro М., Rugge M., Tieppo C. et al.Indefinite for non-invasive neoplasia lesions in gastric intestinal metaplasia : the immunophenotype. J. Clin. Pathol. 2007. Vol. 60. P. 615–621

The authors declare that there are no conflicts of interest present.