pmedpharmФармация и фармакологияPharmacy & Pharmacology2307-92662413-2241Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute - branch of Volgograd State Medical Univer10.19163/2307-9266-2016-4-6-54-71pmedpharm-224Research ArticleФАРМАКОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯPHARMACOLOGY AND CLINICAL PHARMACOLOGYРазработка и валидация метода оценки специфической антигемолитической активности препарата экулизумаб (Солирис )Method development and validation for determination of antihemolytic activity of eculizumab (Soliris)https://orcid.org/0000-0002-7983-5312ПрудниковаЕ. Ю.PrudnikovaE. Yu.

Адрес: МБЦ «Генериум», 601125, Россия, Владимирская область, п. Вольгинский

кандидат ветеринарных наук, научный сотрудник лаборатории биологических методов МБЦ «Генериум». Область научных интересов: биотехнология, вирусология, разработка и валидация биологических методов анализа лекарственных средств, многоцветная проточная цитометрия

601125, Russia, Vladimir region, Volginskiy

Ph.D. in Veterinary Science, Scientist, Laboratory of Biological Methods, IBC Generium. Research area: biotechnology, virology, development and validation of biological methods for medicine analysis, multicolor flow cytometry

prudnikova@ibcgenerium.ruПорошинГ. Н.PoroshinG. N.

Адрес: МБЦ «Генериум», 601125, Россия, Владимирская область, п. Вольгинский

научный сотрудник лаборатории биологических методов МБЦ «Генериум». Область научных интересов: биотехнология, иммунология, онкология, разработка и валидация биологических методов анализа лекарственных средств 

601125, Russia, Vladimir region, Volginskiy

Scientist, Laboratory of Biological Methods, IBC Generium. Research area: biotechnology, immunology, oncology, development and validation of biological methods for medicine analysis

poroshin@ibcgenerium.ruКудинаН. К.KudinaN. K.

Адрес: МБЦ «Генериум», 601125, Россия, Владимирская область, п. Вольгинский

химик лаборатории биологических методов МБЦ «Генериум». Область научных интересов: биотехнология, микробиология, разработка и валидация биологических методов анализа лекарственных средств 

601125, Russia, Vladimir region, Volginskiy

Chemist, Laboratory of Biological Methods, IBC Generium. Research area: biotechnology, microbiology, development and validation of biological methods for medicine analysis

kudina@ibcgenerium.ruЛягоскинИ. В.LyagoskinI. V.

Адрес: МБЦ «Генериум», 601125, Россия, Владимирская область, п. Вольгинский

кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории биологических методов МБЦ «Генериум». Область научных интересов: биотехнология, микробиология, разработка и валидация биологических методов анализа лекарственных средств

601125, Russia, Vladimir region, Volginskiy

Ph.D. in Biology, Scientist, Laboratory of Biological Methods, IBC Generium. Research area: biotechnology, microbiology, development and validation of biological methods for medicine analysis

lyagoskin@ibcgenerium.ruСазоноваЕ. В.SazonovaE. V.

Адрес: МБЦ «Генериум», 601125, Россия, Владимирская область, п. Вольгинский

кандидат медицинских наук, научный сотрудник лаборатории биологических методов МБЦ «Генериум». Область научных интересов: патофизиология, иммунология, онкология, многоцветная проточная цитометрия

601125, Russia, Vladimir region, Volginskiy

Ph.D. in Medicine, Scientist, Laboratory of Biological Methods, IBC Generium. Research area: pathophysiology, immunology, oncology, multicolor flow cytometry

sazonova@ibcgenerium.ruВишневскийА. Ю.VishnevskiyA. Yu.

Адрес: МБЦ «Генериум», 601125, Россия, Владимирская область, п. Вольгинский

кандидат биологических наук, начальник отдела аналитических методов МБЦ «Генериум». Область научных интересов: биотехнология, разработка лекарственных препаратов, масс-спектрометрия, хроматография, иммунохимия

601125, Russia, Vladimir region, Volginskiy

Ph.D. in Biology, Head of Analytical Methods Department, IBC Generium. Research area: biotechnology, development of medicine, mass spectrometry, chromatography, immunochemistry

vishnevskiy@ibcgenerium.ruАббасоваС. Г.AbbasovaS. G.

Адрес: МБЦ «Генериум», 601125, Россия, Владимирская область, п. Вольгинский

доктор биологических наук, начальник лаборатории биологических методов МБЦ «Генериум». Область научных интересов: иммунология, онкология, биотехнология, разработка лекарственных препаратов

601125, Russia, Vladimir region, Volginskiy

D.Sc. in Biology, Head of Biological Methods Laboratory, IBC Generium. Research area: immunology, oncology, biotechnology, development of medicine

abbasova@ibcgenerium.ruМеждународный биотехнологический центр «Генериум»РоссияInternational Biotechnology Center «Generium»Russian Federation201609032017465471Copyright © Прудникова Е.Ю., Порошин Г.Н., Кудина Н.К., Лягоскин И.В., Сазонова Е.В., Вишневский А.Ю., Аббасова С.Г., 20172017Прудникова Е.Ю., Порошин Г.Н., Кудина Н.К., Лягоскин И.В., Сазонова Е.В., Вишневский А.Ю., Аббасова С.Г.Prudnikova E.Y., Poroshin G.N., Kudina N.K., Lyagoskin I.V., Sazonova E.V., Vishnevskiy A.Y., Abbasova S.G.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmpharm.ru/jour/article/view/224

Биоаналитические методы применяются как на стадии разработки и испытания препаратов, так и при серийном выпуске фармацевтической продукции. Оценка качества лекарственных препаратов (ЛП) и субстанций производится с помощью точных и воспроизводимых методов. Точность и воспроизводимость метода проверяются при проведении валидационных работ, которые являются обязательными при регистрации ЛП. Основной задачей валидации метода является экспериментальное доказательство его пригодности для целей, которые должны быть достигнуты. Валидация биоаналитических методик – это один из элементов валидации всего процесса производства лекарств [1, 2].

Цель исследования

Цель исследования: валидация разработанного в ООО «МБЦ «Генериум» метода оценки специфической антигемолитической активности препарата экулизумаб.

Материалы и методы

Материалы и методы: препарат экулизумаб, сенсибилизированные антителами куриные эритроциты, комплемент-содержащая сыворотка человека.

Результаты

Результаты: при валидации метода показаны его специфичность и соответствие критериям — правильность определения относительной специфической активности (103.0±1.4)%), устойчивость (CV – 11.5%), сходимость – (CV – (4.9±0.9)%), воспроизводимость – (CV – (3.5±0.4)%) и линейность (k-1.0275;R2 – 0.9975). При валидации в целом подтверждена пригодность системы (оборудование, материалы, аналитические операции и анализируемые образцы) для получения достоверного результата.

Обсуждение результатов

Обсуждение результатов. При валидации метода получено экспериментальное доказательство его пригодности для достижения поставленной цели – оценки специфической активности препарата экулизумаб. Простота исполнения метода позволит получать точные результаты при его применении в других лабораториях. Разработанный метод может быть использован не только для определения специфической активности ЛС Солирис, но и других фармацевтических субстанций и лекарственных средств (ЛС) на основе антител аффинных к С5 компонента комплемента человека.

Bioanalytical methods are applied at the development and test of drugs as well as at the step of pharmaceutic products issue. Drugs and excipients quality estimation is made by means of precise and reproducible methods. Accuracy and reproducibility of a method is established during validation which is obligatory for medicine registration. The principal task of method validation is experimental evidence of its suitability for the objectives to be achieved. Validation of bioanalytical methods is one of the elements of the whole medicine production validation [1, 2].

The aim of research

The aim of research: to validate a method for determination of specific anti-hemolytic activity of eculizumab developed in LCC “IBC Generium”.

Materials and methods

Materials and methods: eculizumab, antibody-sensitized chicken erythrocytes, complement-containing human serum.

Results

Results. We demonstrated the specificity of the method and its correspondence to criteria of accuracy (103.0±1.4)%, robustness (CV – 11.5%), repeatability (CV – (4.9±0.9)%), reproducibility (CV – (3.5±0.4)%), and linearity (k -1.0275; R2 – 0.9975) during validation. The system validity (equipment, materials, analytical operations and analyzed samples) was confirmed for true results obtaining during validation.

Results discussion

Results discussion. Experimental evidence of suitability of the method for eculizumab specific activity assessment was obtained in course of validation. The simplicity of the method allows obtaining accurate results in other laboratories. The developed method can be used not only for specific activity of Soliris determination but also for other pharmaceutical substances and drugs based on antibodies specific to human complement C5.

экулизумабантигемолитическая активностьвалидацияспецифичностьправильностьлинейностьпрецизионностьвоспроизводимостьeculizumabanti-hemolytic activityvalidationspecificityaccuracylinearityprecisionreproducibilityReferencesГОСТ Р 52249-2009 «Правила производства и контроля качества лекарственных средств».GOST R 52249-2009. Good manufacturing practice for medicinal products (GMP).2010 (In Russian)Findlay J.W.A., Smith W.C., Lee J.W., Nordblom G.D., Das I., DeSilva B.S., Khan M.N., Bowsher R.R. Validation of immunoassays for bioanalysis: a pharmaceutical industry perspective. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2000, N. 21, рр. 1249-1273.Findlay J.W.A., Smith W.C., Lee J.W., Nordblom G.D., Das I., DeSilva B.S., Khan M.N., Bowsher R.R. Validation of immunoassays for bioanalysis: a pharmaceutical industry perspective. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2000, N. 21, рр. 1249-1273.Assay Validation Methods – Definitions and Terms. Available from: http://www.fws.gov/aah/PDF/QI-Terms%20and%20Defs.pdfAssay Validation Methods - Definitions and Terms. Available from: http://www.fws.gov/aah/PDF/QI-Terms%20and%20Defs.pdfHill A., Rother R. P., Arnold L., Kelly R., Cullen M.J., Richards S.J., Hillmen P. Eculizumab prevents intravascular hemolysis in patients with paroxysmal nocturnal hemoglobinuria and unmasks low-level extravascular hemolysis occurring through C3 opsonization. Haematologica April. 2010, N. 95, рр. 567-573.Hill A., Rother R. P., Arnold L., Kelly R., Cullen M.J., Richards S.J., Hillmen P. Eculizumab prevents intravascular hemolysis in patients with paroxysmal nocturnal hemoglobinuria and unmasks low-level extravascular hemolysis occurring through C3 opsonization. Haematologica April. 2010, N. 95, рр. 567-573.Johnson R., Hillmen P. Johnson, R. Paroxysmal nocturnal haemoglobinuria: Nature’s gene therapy? J Clin Pathol. 2002, N. 55(3), рр.145−52.Johnson R., Hillmen P. Johnson, R. Paroxysmal nocturnal haemoglobinuria: Nature’s gene therapy? J Clin Pathol. 2002, N. 55(3), рр. 145−52.Parker C.1., Omine M., Richards S., Nishimura J., Bessler M., Ware R., Hillmen P., Luzzatto L., Young N., Kinoshita T., Rosse W., Socié G. International PNH Interest Group. Diagnosis and management of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. Blood. 2005, N. 106 (12), рр. 3699-709.Parker C.1., Omine M., Richards S., Nishimura J., Bessler M., Ware R., Hillmen P., Luzzatto L., Young N., Kinoshita T., Rosse W., Socié G. International PNH Interest Group. Diagnosis and management of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. Blood. 2005, N. 106 (12), рр. 3699-709.Hillmen P., Hall C., Marsh J., Elebute M., Bombara M.P., Petro B.E., Cullen M.J., Richards S.J., Rollins S.A., Mojcik C.F., Rother R.P. Effect of eculizumab on hemolysis and transfusion requirements in patients with paroxysmal nocturnal hemoglobinuria . N Engl J Med. 2004,Hillmen P., Hall C., Marsh J., Elebute M., Bombara M.P., Petro B.E., Cullen M.J., Richards S.J., Rollins S.A., Mojcik C.F., Rother R.P. Effect of eculizumab on hemolysis and transfusion requirements in patients with paroxysmal nocturnal hemoglobinuria . N Engl J Med. 2004, N. 350 (6). рр. 552−9.N. 350 (6). рр. 552−9.Rother R.P., Rollins S.A., Mojcik C.F., Brodsky R.A., Bell L. Discovery and development of the complement inhibitor eculizumab for the treatment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria . Nat Biotech. 2007, N. 25 (11), рр. 1256–64.Rother R.P., Rollins S.A., Mojcik C.F., Brodsky R.A., Bell L. Discovery and development of the complement inhibitor eculizumab for the treatment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria . Nat Biotech. 2007, N. 25 (11), рр. 1256–64.Scientific discussion. Available from: http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/EPAR_-_Scientific_Discussion/human/000791/WC500054212.pdfScientific discussion. Available from: h ttp ://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/EPAR_-_Scientific_Discussion/human/000791/WC500054212.pdfGuideline on bioanalytical method validation: http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2011/08/WC500109686.pdf.Guideline on bioanalytical method validation: http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2011/08/WC500109686.pdf.A Step-by-Step Approach to Establishing a Method Validation Program: http://www.ivtnetwork.com/sites/default/files/A%20Step%20by%20Step%20Approach%20to%20Establishing%20a%20Method%20Validation%20Program.pdfA Step-by-Step Approach to Establishing a Method Validation Program: http://www.ivtnetwork.com/sites/default/files/A%20Step%20by%20Step%20Approach%20to%20Establishing%20a%20Method%20Validation%20Program.pdfHohensteina A., Hebella M., Zikryb H. Development and validation of a novel cell-based assay for potencydetermination of human parathyroid hormone (PTH). Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2014, N. 98, рр. 345-350.Hohensteina A., Hebella M., Zikryb H. Development and validation of a novel cell-based assay for potencydetermination of human parathyroid hormone (PTH). Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2014, N. 98, рр. 345-350.Hohensteina A., Hebella M., Zikryb H. Development and validation of a novel cell-based assay for potencydetermination of human parathyroid hormone (PTH). Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2014, N. 98, рр. 345-350.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.