начальник цеха «Комбинированные вакцины» Федерального государственного унитарного предприятия «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов» Федерального медико-биологического агентства России. Область научных интересов: биотехнология, технологии микробного синтеза, получение субстанций, выделение активного вещества
head of the department “Combined Vaccines” of the federal state unitary enterprise “The Saint-Petersburg scientific research institute of vaccines and serums and the enterprise for the production of bacterial preparations” of Federal medical and biologic agency of Russia. Research interests: biotechnology, technologies of microbial synthesis, obtaining of substances, isolation of active substance
кандидат технических наук, ведущий инженер-технолог цеха «Комбинированные вакцины» Федерального государственного унитарного предприятия «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов» Федерального медико-биологического агентства России. Область научных интересов: биотехнология, технологии микробного синтеза, получение субстанций, выделение активного вещества
PhD (Engineering), leading process engineer of the department “Combined Vaccines” of the federal state unitary enterprise “The Saint-Petersburg scientific research institute of vaccines and serums and the enterprise for the production of bacterial preparations” of Federal medical and biologic agency of Russia. Research interests: biotechnology, technologies of microbial synthesis, obtaining of substances, isolation of active substance
директор Федерального государственного унитарного предприятия «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов» Федерального медико-биологического агентства России. Область научных интересов: биотехнология, технологии микробного синтеза, технологии вирусных вакцин
director of the federal state unitary enterprise “The Saint-Petersburg scientific research institute of vaccines and serums and the enterprise for the production of bacterial preparations” of Federal medical and biologic agency of Russia. Research interests: biotechnology, technologies of microbial synthesis, technologies of viral vaccines
доктор биологических наук, профессор, заместитель директора по международным отношениям Федерального государственного унитарного предприятия «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов» Федерального медико-биологического агентства России. Область научных интересов: биотехнология, технологии микробного синтеза, технологии вирусных вакцин, рекомбинантные вакцины
PhD (Biology), professor, deputy director for international relations of the federal state unitary enterprise “The Saint-Petersburg scientific research institute of vaccines and serums and the enterprise for the production of bacterial preparations” of Federal medical and biologic agency of Russia. Research interests: biotechnology, technologies of microbial synthesis, technologies of viral vaccines, recombinant vaccines
Несмотря на мировую практику, в Российской Федерации иммунизация против гемофильной инфекции проводится только у детей из групп риска, что может быть связано с отсутствием производства данной вакцины в РФ. Поэтому разработка технологии получения полирибозилрибитолфосфата (ПРФ, действующее вещество Hib-вакцины) остается актуальной. Ранее сотрудниками ФГУП СПбНИИВС ФМБА России был выделен и идентифицирован штамм Haemophilus influenzae SPB тип b В-7884, подобраны условия его культивирования и первичного выделения ПРФ из культуральной жидкости. Цель работы – изучение возможности исключения стадии центрифугирования для отделения биомассы H. influenzae SPB тип b В-7884 перед осветлением на каскаде фильтровальных дисков, а также разработка последующих этапов выделения ПРФ из полученного промежуточного продукта. Материалы и методы. Выделение ПРФ из инактивированной культуральной жидкости штамма В-7884 проводили при помощи центрифугирования, фильтрации, осаждения, гомогенизации, экстракции при различных условиях. Концентрацию ПРФ в промежуточных продуктах определяли орциноловым методом, подлинность – при помощи реакции латекс-агглютинации. Результаты и обсуждение. Подобрана оптимальная схема выделения и очистки активной фармацевтической субстанции ПРФ, включающая фильтрацию через каскад глубинных фильтров Zeta plus LP 60 (0,3–0,6 мкм) и Zeta plus LP 90 (0,1–0,3 мкм), концентрирование и диафильтрацию на ультрафильтрационных кассетах с номинальным отсечением по молекулярной массе 30 кДа, осаждение 10% раствором цетилтриметиламмония бромида (5% по объему) с последующей гомогенизацией полученного осадка (в присутствии 12,5% этанола от объема концентрата) и экстракцией (32,5% этанола), фильтрацию через глубинные фильтры Zeta Plus SP 30 и угольные фильтры Zeta Plus Carbon R53, а также осаждение 1,0% (по объему) 4,0 M раствором натрия хлорида и заморозку при –(20±2)°С. Заключение. Полученные результаты станут основой для дальнейшей наработки субстанции полисахарида и позволят приступить к следующему этапу разработки технологии вакцины против Haemophilus influenzae тип b – конъюгации с белком-носителем.
Despite the world practice, in the Russian Federation immunization against hemophilic infection is carried out only for the children from risk groups, which may be due to the lack of production of this vaccine in the Russian Federation. Therefore, the development of technology for the preparation of polyribosylribitol phosphate (PRP, the active substance of the Hib vaccine) remains relevant. Earlier, the employees of the federal state unitary enterprise “Saint-Petersburg scientific research institute of vaccines and serums and the enterprise for the production of bacterial preparations” of Federal medical and biologic agency of Russia isolated and identified the strain of Haemophilus influenzae SPB type b B-7884. The conditions for cultivation of the strain B-7884 and primary isolation of PRP from the culture liquid were arranged. The aim of the work was to study the possibility of excluding the centrifugation stage for separating H. influenzae SPB type b B-7884 biomass before clarification on the cascade of filter discs, and the development of subsequent stages of PRP isolation from the obtained intermediate product. Materials and methods. PRP isolation from an inactivated culture liquid of strain B-7884 was carried out by centrifugation, filtration, precipitation, homogenization, extraction under various conditions. The concentration of PRP in the intermediate products was determined by the orcinol method, the identity was determined by the latex agglutination test. Results and discussion. The optimal scheme for isolation and purification of the active pharmaceutical ingredient PRP, including filtration through the cascade of deep filters Zeta plus LP 60 (0.3–0.6 μm) and Zeta plus LP 90 (0.1–0.3 μm), concentration and diafiltration on ultrafiltration cassettes with nominal molecular weight cut-off of 30 kDa, precipitation with 10% cetyltrimethylammonium bromide solution (5% v/v), with subsequent homogenization of the obtained precipitate (in the presence of 12.5% of ethanol from the concentrate volume) and extraction (32.5% ethanol), filtration through depth filters Zeta Plus SP 30 and carbon filters Zeta Plus Carbon R53, and precipitation by 1.0% (v/v) 4.0 M sodium chloride solution and freezing at –(20 ± 2)°C, was developed. Conclusion. The obtained results will become the basis for the further development of the polysaccharide substance and allow us to proceed to the next stage in the development of the vaccine against Haemophilus influenzae type b – conjugation with the carrier protein.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.