Мыльников Павел Юрьевич – ассистент кафедры фармакологии с курсом фармации факультета дополнительного профессионального образования
390026, Россия, Рязань, Высоковольтная, 9
Pavel Yu. Mylnikov – Assistant, Department of Pharmacology with a course of pharmacy, Faculty of Continuing Professional Education
9, Vysokovoltnaya St., Ryazan, Russia, 390026
Черных Иван Владимирович – кандидат биологических наук, заведующий кафедрой фармацевтической химии
390026, Россия, Рязань, Высоковольтная, 9
Ivan V. Chernykh – Candidate of Sciences (Biology), Head of the Department of Pharmaceutical Chemistry
9, Vysokovoltnaya St., Ryazan, Russia, 390026
Щулькин Алексей Владимирович – кандидат медицинских наук, доцент кафедры фармакологии с курсом фармации факультета дополнительного профессионального образования
390026, Россия, Рязань, Высоковольтная, 9
Aleksey V. Shchulkin – Candidate of Sciences (Medicine), Associate Professor of the Department of Pharmacology with a course of pharmacy, Faculty of Continuing Professional Education
9, Vysokovoltnaya St., Ryazan, Russia, 390026
Попова Наталья Михайловна – кандидат медицинских наук, доцент кафедры фармакологии с курсом фармации факультета дополнительного профессионального образования
390026, Россия, Рязань, Высоковольтная, 9
Natalia M. Popova – Candidate of Sciences (Medicine), Assistant Professor of the Department of Pharmacology with a Pharmacy Course, Faculty of Continuing Professional Education
9, Vysokovoltnaya St., Ryazan, Russia, 390026
Якушева Елена Николаевна – доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой фармакологии с курсом фармации факультета дополнительного профессионального образования
390026, Россия, Рязань, Высоковольтная, 9
Elena N. Yakusheva – Doctor of Sciences (Medicine), Professor, Head of the Department of Pharmacology with a Pharmacy Course, Faculty of Continuing Professional Education
9, Vysokovoltnaya St., Ryazan, Russia, 390026
Исследование фармакокинетики маркерных субстратов белка-транспортера гликопротеина-Р (Pgp, ABCB1-белка), к которым относится фексофенадин, является одним из способов оценки его функциональной активности.
Цель. Разработка ВЭЖХ-методики количественного определения фексофенадина в печени кроликов.
Материалы и методы. Количественное определение фексофенадина осуществляли с использованием хроматографической системы Stayer («Аквилон», Россия) с УФ детектором UVV 104. Применяли обращенно-фазную хроматографическую колонку Luna C18 100Å (250*4,6) с зернением 5 мкм при температуре 45°С. Определение концентрации фексофенадина проводили методом абсолютной калибровки по площади пиков.
Результаты. Исследование проводили в изократическом режиме. Состав подвижной фазы: вода деионизированная, ацетонитрил и ледяная уксусная кислота в соотношении 267,4:120:4,33, доведенные триэтиламином до pH=6,7. Пробоподготовка заключалась в гомогенизации 500 мг измельченной печени в 500 мкл воды очищенной с последующим центрифугированием (1750 g) и отбором надосадочной жидкости. Осаждение белка осуществлялось ацетонитрилом (2,5 мл), подкисленным 375 мкл кислоты хлористоводородной путем встряхивания на приборе Shaker (500 об./мин). Надосадочный слой переносили в отдельную пробирку, добавляли по 2 мл метилена хлористого, эфира диэтилового и этилацетата и повторно встряхивали 10 мин (при 500 об./мин). Затем центрифугировали (1750 g) и упаривали супернатант на роторно-вакуумном испарителе при 50°С. К сухому остатку добавляли 300 мкл подвижной фазы и 100 мкл инжектировали в хроматограф. Метод был валидирован в линейном диапазоне от 3 до 60 мкг/г фексофенадина с приемлемой внутри- и межцикловой точностью, прецизионностью и стабильностью. Методика была апробирована на кроликах после внутривенного введения им фексофенадина в дозе 11 мг/кг массы.
Заключение. Разработана ВЭЖХ-методика количественного определения фексофенадина в ткани печени кроликов, которая может использоваться для оценки функциональной активности Pgp в доклинических исследованиях.
Список сокращений: Pgp − гликопротеин-Р, ВЭЖХ – высокоэффективная жидкостная хроматография, об./мин – оборотов в минуту
The investigation of pharmacokinetics of marker substrates of carrier protein P-glycoprotein (Pgp, ABCB1-protein) including fexofenadine, is one of the methods of its functional activity evaluation.
The aim of the study was to work out the HPLC methods of the quantitative determination of fexofenadine in rabbits’ liver.
Materials and methods. The quantitative determination of fexofenadine was performed using Stayer chromatographic system (Akvilon, Russia) with UVV 104 ultraviolet detector. Reverse-phased chromatographic column Luna C18 100Å (250*4.6) was used with 5 µm granulation at 45°С. The сoncentration of fexofenadine was determined by methods of absolute peak area calibration.
Results. The work was conducted in the isocratic mode. The composition of the mobile phase consisted of deionized water, acetonitrile and glacial acetic acid at the ratio of 267.4:120:4.33 brought to pH=6.7 with triethylamine. The sample processing was in the form of homogenization of 500 mg of ground liver in 500 µl of purified water with the subsequent centrifugation (1750 g) and selection of the supernatant. The proteins were precipitated by acetonitrile (2.5 ml) acidified with 375 µl of hydrochloric acid by shaking at 500 rev/min. The supernatant was transported into a separate test tube, where methylene chloride, diethyl ether and ethyl acetate were added (2 ml each). Then the solution was again shaken for 10 minutes (500 rev/min). After that, the solution was centrifuged (1750 g) and the supernatant was evaporated on a rotor-vacuum evaporator at 50°С. 300 µl of the mobile phase was added to the dry residue, and 100 µl was injected into the chromatograph. The method was validated in the linear range from 3 to 60 µg/g of fexofenadine with the acceptable intra- and intercycle accuracy, precision and stability. The method was tested on rabbits after the intravenous administration of fexofenadine at the dose of 11 mg/kg.
Conclusion. The HPLC methods of fexofenadine quantitative determination in the hepatic tissue of rabbits has been worked out. It can be used for the evaluation of the functional activity of Pgp in preclinical studies.
Abbreviations: Pgp – P-glycoprotein, HPLC – high performance liquid chromatography, rev/min – revolutions per minute
The authors declare that there are no conflicts of interest present.