Оценка аллергизирующих и иммунотоксичных свойств рекомбинантной неиммуногенной стафилокиназы в доклинических и клинических исследованиях

Цель. Изучить возможные аллергизирующие и иммунотоксичные свойства молекулы рекомбинантной неиммуногенной стафилокиназы с заменой аминокислот Lys₇₄, Glu₇₅ и Arg₇₇ на аланин в доклинических и клинических исследованиях.

Материалы и методы. Исследование аллергизирующих и иммунотоксических свойств препарата рекомбинантной неиммуногенной стафилокиназы проведено по стандартным методикам в соответствии с требованиями Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ на морских свинках (n=15) и мышах (n=45) в дозах, в 5, 10 и 20 раз превышающих терапевтические (для человека). Клиническое исследование проведено у 100 пациентов с острым инфарктом миокарда с подъёмом сегмента ST после однократного внутривенного введения препарата. Исследование включало определение титров специфических антител к рекомбинантной неиммуногенной стафилокиназе и оценку нейтрализующей активности плазмы.

Результаты. При проведении полного комплекса доклинических исследований было установлено, что препарат не влияет на клеточный и гуморальный иммунный ответ у морских свинок и мышей в дозах, кратно превышающих терапевтические для человека. Установлено, что препарат не вызывал реакцию гиперчувствительности немедленного типа (индекс по Weigle 0) и замедленного типа (0 баллов по С.В. Суворову) у морских свинок, а также не влиял на клеточность подколенных лимфоузлов (индекс реакции 0,91) и число ядросодержащих и антителообразующих клеток в селезёнке мышей. В результате клинического исследования рекомбинантной неиммуногенной стафилокиназы аллергических реакций не зарегистрировано. Оценка нейтрализующей активности плазмы крови пациентов, которым вводилась рекомбинантная неиммуногенная стафилокиназа, показало, что пробы 70% пациентов не обладают нейтрализующей активностью: 30% проб пациентов характеризовались минимальной нейтрализующей активностью 0,33±0,02 мкг/мл, что в 30–310 раз ниже, чем после применения нативной стафилокиназы. Эти значения в 7,8 раз ниже определяемой концентрации рекомбинантной неиммуногенной стафилокиназфы в крови (2,59 мкг/мл). Таким образом, препарат не приводит к образованию антител, способных нейтрализовать его действие при повторном введении.

Заключение. По результатам проведённых исследований доказано отсутствие аллергизирующих и иммунотоксичных свойств рекомбинантной неиммуногенной стафилокиназы и ее безопасность в отношении иммунной системы.

1. GBD 2019 Diseases and Injuries Collaborators. Global burden of 369 diseases and injuries in 204 countries and territories, 1990–2019: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2019 // Lancet. – 2020. – Vol. 396, No. 10258. – P. 1204–1222. DOI: 10.1016/S0140-6736(20)30925-9. Erratum in: Lancet. – 2020. – Vol. 396, No. 10262. – P. 1562. DOI: 10.1016/S0140-6736(20)32226-1

2. Collen D. Staphylokinase: a potent, uniquely fibrin-selective thrombolytic agent // Nature Medicine. – 1998. – Vol. 4, No. 3. – P. 279–284. DOI: 10.1038/nm0398-279

3. Christener R.B., Boyle M.D. Role of Staphylokinase in the acquisition of plasmin-(ogen) dependent enzymatic activity by Staphylococci // J Infect Dis. – 1986. – Vol. 173, No. 1. – P. 104–112. DOI: 10.1093/infdis/173.1.104

4. Verstraete M. Third-Generation Thrombolytic Drugs // Am J Med. 2000. – Vol. 109, No. 1. – P. 52–58. DOI: 10.1016/s0002-9343(00)00380-6

5. Toul M., Nikitin D., Marek M., Damborsky J., Prokop Z. Extended mechanism of the plasminogen activator staphylokinase revealed by global kinetic analysis: 1000-fold higher catalytic activity than that of clinically used alteplase // ACS Catalysis. – 2022. – Vol. 12. – P. 3807–3814. DOI: 10.1021/acscatal.1c05042

6. Маркин С.С., Семенов А.М., Марков В.А., Низов А.А., Пономарев Э.А., Лебедев П.А. Клиническое исследование отечественного фибринселективного тромболитического препарата Фортелизин® (III фаза) // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Медицина. – 2012. – № 1. – C. 105–110. EDN: OPPLCH

7. Weigle W.O., Cochrane C.G., Dixon F.J. Anaphylactogenic properties of soluble antigen-antibody complexes in guinea pig and rabbit // Journal of Immunology. – 1960. – Vol. 85. – P. 469–477.

8. Descotes J., Verdier F. Popliteal lymph node assay. In: Methods in Immunotoxicology, Volume 1. Wiley-Liss, Inc., 1995.

9. Jerne N.K., Nordin A.A., Plaque formation in agar by single antibody-producing cells // Science. – 1963. – Vol. 140, No. 3565. – P. 405.

10. Марков В.А., Дупляков Д.В., Константинов С.Л., Клейн Г.В., Аксентьев С.Б., Платонов Д.Ю., Вышлов Е.В., Пономарев Э.А., Рабинович Р.М., Макаров Е.Л., Кулибаба Е.В., Юневич Д.С., Крицкая О.В., Баранов Е.А., Талибов О.Б., Герасимец Е.А. Фортелизин® в сравнении с Метализе® при инфаркте миокарда с подъемом сегмента ST: однолетние результаты и клинические исходы многоцентрового рандомизированного исследования ФРИДОМ1 // Российский кардиологический журнал. – 2018. – № 11. – С. 110–116. DOI: 10.15829/1560-4071-2018-11-110-116

11. Марков В.А., Дупляков Д.В., Константинов С.Л., Клейн Г.В., Аксентьев С.Б., Платонов Д.Ю., Вышлов Е.В., Пономарев Э.А., Рабинович Р.М., Макаров Е.Л., Кулибаба Е.В., Юневич Д.С., Крицкая О.В., Баранов Е.А., Талибов О.Б., Куценко В.А., Орловский А.А., Вязова Н.Л., Колединский А.Г., Семенов А.М., Семенов М.П., Яровая Е.Б., Ускач Т.М., Шахнович Р.М., Терещенко С.Н., Маркин С.С. Расширенные результаты применения лекарственного препарата Фортелизин® в исследовании ФРИДОМ1 и реальной клинической практике // Российский кардиологический журнал. – 2022. – Т. 27, № 8. – С. 5178. DOI: 10.15829/1560-4071-2022-5178

12. Lequin R.M. Enzyme immunoassay (EIA)/enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) // Clinical Chemistry. – 2005. – Vol. 51, No. 12. – P. 2415–2418. DOI: 10.1373/clinchem.2005.051532

13. Collen D., Moreau H., Stockx L., Vanderschueren S. Recombinant staphylokinase variants with altered immunoreactivity. II. Thrombolytic properties and antibody induction // Circulation. – 1996. – Vol. 94. – P. 207–216.

14. Маркин С.С., Семенов А.М., Арзамасцев Е.В., Марков В.А., Вышлов Е.В., Низов А.А., Аксентьев С.Б., Пономарев Э.А., Гридасов Г.Н., Лебедев П.А., Барбараш О.Л., Кашталап В.В. Доклинические и клиническое исследование фибринселективного тромболитического препарата Фортелизин® // Медицинский академический журнал. – 2012. – Т. 12, № 1. – C. 80–86. EDN: QBXHQB

15. Collen D., Stockx L., Lacroix H., Suy R. Vanderschueren S. Recombinant Staphylokinase Variants With Altered Immunoreactivity IV. Identification of variants with reduced antibody induction but intact potency // Circulation. – 1997. – Vol. 95, No. 2. – P. 463–472.

16. Laroche Y., Heymans S., Capaert S., De Cock F., Demarsin E., Collen D. Recombinant staphylokinase variants with reduced antigenicity due to elimination of B-lymphocyte epitopes // Blood. – 2000. – Vol. 96, No. 4. – P. 1425–1432.

17. Markin S.S., Lapshin R.D., Baskina O.S., Korotchenko S.A., Mukhina I.V., Ivanov S.V., Semenov M.P., Beregovykh V.V., Semenov A.M.. Nebulized Non-Immunogenic Staphylokinase in the Mice Acute Lung Injury Model // Int J Mol Sci. – 2022. – Vol. 23, No. 16. – P. 9307. DOI: 10.3390/ijms23169307.

18. Терещенко С.Н., Багненко С.Ф., Марков В.А., Мирошниченко А.Г., Серебренников И.И., Крылов С.О., Лищенко А.Н., Горбачева С.М., Кузнецов В.В., Остроумова Л.А., Ихаев А.Б., Дупляков Д.В., Чефранова Ж.Ю., Константинов С.Л., Вышлов Е.В., Пономарев Э.А., Рабинович Р.М., Петрушин М.А., Куценко В.А., Колединский А.Г., Вязова Н.Л., Стрябкова Г.И., Ускач Т.М., Миннуллин И.П., Гапонова Н.И., Труханова И.Г., Прохасько Л.В., Мухин С.И., Костылев В.В., Краузе О.В., Белова Л.П., Лесников Е.В., Жуков Г.П., Прибылов С.А., Фарсиянц А.В., Жиров А.В., Штегман О.А., Иванов В.Б., Тимощенко Е.С., Макаров Е.Л., Толстой О.А., Сачков Д.Ю., Карамова И.М., Рахматуллин А.Р., Костогрыз В.Б., Волков Е.С., Рукосуев Е.В., Юркин Е.П., Шахнович Р.М., Явелов И.С., Эрлих А.Д., Иванов С.В., Семенов А.М., Семенов М.П., Яровая Е.Б., Маркин С.С. Безопасность догоспитального тромболизиса неиммуногенной стафилокиназой у 51021 пациентов с инфарктом миокарда с подъемом сегмента ST: данные ФРИДОМ-регистра // Российский кардиологический журнал. – 2025. – Т. 30, № 6. – С. 6355. DOI: 10.15829/1560-4071-2025-6355

19. Бойцов С.А., Шахнович Р.М., Терещенко С.Н., Эрлих А.Д., Певзнер Д.В., Гулян Р.Г., Рытова Ю.К., Дмитриева Н.Ю., Вознюк Я.М., Мусихина Н.А., Назарова О.А., Погорелова Н.А., Санабасова Г.К., Свиридова А.В., Сухарева И.В., Филинова А.С., Шилко Ю.В., Ширикова Г.А. Особенности реперфузионной стратегии лечения пациентов с инфарктом миокарда с подъемом сегмента ST по данным Российского регистра острого инфаркта миокарда – РЕГИОН-ИМ // Кардиология. – 2024. – Т. 64, № 2 – С. 3–17. DOI: 10.18087/cardio.2024.2.n2601

20. Gusev E.I., Martynov M.Yu., Nikonov A.A., Shamalov N.A., Semenov M.P., Gerasimets E.A., Yarovaya E.B., Semenov A.M., Archakov A.I., Markin S.S.; FRIDA Study Group. Non-immunogenic recombinant staphylokinase versus alteplase for patients with acute ischaemic stroke 4.5 h after symptom onset in Russia (FRIDA): a randomised, open label, multicentre, parallel-group, non-inferiority trial // Lancet Neurology. – 2021. – Vol. 20, No. 9. – P. 721–728. DOI: 10.1016/S1474-4422(21)00210-6

21. Гусев Е.И., Мартынов М.Ю., Шамалов Н.А., Яровая Е.Б., Семенов М.П., Семенов А.М., Орловский А.А., Куценко В.А., Никонов А.А., Аксентьев С.Б., Юневич Д.С., Алашеев А.М., Андрофагина О.В., Бобков В.В., Хорошавина К.В., Горбачев В.И., Коробейников И.В., Грешнова И.В., Добровольский А.В., Елеманов У.А., Жуковская Н.В., Захаров С.А., Чирков А.Н., Корсунская Л.Л., Нестерова В.Н., Никонова А.А., Низов А.А., Гиривенко А.И., Пономарев Э.А., Попов Д.В., Прибылов С.А., Семихин А.С., Тимченко Л.В., Жадан О.Н., Федянин С.А., Чефранова Ж.Ю., Лыков Ю.А., Чуприна С.Е., Воробьев А.А., Арчаков А.И., Маркин С.С. Неиммуногенная стафилокиназа — новый тромболитический препарат в лечении ишемического инсульта (результаты исследования ФРИДА) // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. – 2022. – Т. 122, № 7. – С. 56–65. DOI: 10.17116/jnevro202212207156

22. Kirienko A.I., Leontyev S.G., Tereschenko S.H., Yavelov I.S., Shakhnovich R.M., Erlikh A.D., Talibov O.B., Yarovaya E.B., Semenov A.M., Semenov M.P., Ivanov S.V., Beregovykh V.V., Archakov A.I., Markin S.S.; FORPE study group. Non-immunogenic recombinant staphylokinase versus alteplase for patients with massive pulmonary embolism: a randomised open-label, multicenter, parallel-group, non-inferiority trial FORPE // Journal of Thrombosis and Haemostasis. – 2025. – Vol. 23, No. 2. – P. 657–667. DOI: 10.1016/j.jtha.2024.09.035

23. Кириенко А.И., Леонтьев С.Г., Яровая Е.Б., Константинов С.Л., Орлов Б.Б., Мерай И., Дупляков Д.В., Олейников В.Е., Васильева Е.Ю., Пономарев Э.А., Прибылов С.А., Комарова А.Г., Бобков В.В., Рабинович Р.М., Клейн Г.В., Шогенов З.С., Карабач Ю.В., Золкин В.Н., Кулабухов В.В., Кашталап В.В., Линев К.А., Стрябкова Г.И., Яснопольская Н.В., Толмачева В.Ю., Чефранова Ж.Ю., Лыков Ю.А., Панина Е.С., Соловьева Н.В., Рыбин Е.В., Фурман Н.В., Кулибаба Е.В., Макухин В.В., Колединский А.Г., Муллова И.С., Черепанова Н.А., Павлова Т.В., Саввинова П.П., Либов И.А., Игошин А.С., Богомазов И.Ю., Печерина Т.Б., Люднев Л.О., Власов П.Н., Авдеева И.В., Максимов Д.Б., Комиссарова Е.В., Иванов В.С., Вязова Н.Л., Вышлов Е.В., Куртасов Д.С., Куценко В.А., Ивлев О.Е., Сопленкова А.Г., Терещенко С.Н., Явелов И.С., Шахнович Р.М., Эрлих А.Д., Талибов О.Б., Семенов А.М., Семенов М.П., Иванов С.В., Ромашова Ю.А., Береговых В.В., Арчаков А.И., Маркин С.С. Неиммуногенная стафилокиназа — тромболитический препарат в лечении массивной тромбоэмболии легочной артерии: результаты клинического исследования ФОРПЕ // Российский кардиологический журнал. – 2024. – Т. 29, № 11. – С. 6157. DOI: 10.15829/1560-4071-2024-6157

24. Терещенко С.Н., Яровая Е.Б., Леонтьев С.Г., Явелов И.С., Шахнович Р.М., Эрлих А.Д., Ускач Т.М., Дупляков Д.В., Куценкo В.А., Ивлев О.Е., Сопленкова А.Г., Семенов А.М., Семенов M.П., Иванов С.В., Маркин С.С. Неиммуногенная стафилокиназа у пациентов с массивной тромбоэмболией легочных артерий промежуточно-высокого риска: протокол многоцентрового двойного слепого рандомизированного плацебо-контролируемого исследования ФОРПЕ-2 // Российский кардиологический журнал. – 2025. –Т. 30, № 2. – С. 6291. DOI: 10.15829/1560-4071-2025-6291

25. Затевахин И.И., Чупин А.В., Карпенко А.А. Интраартериальный тромболизис неиммуногенной стафилокиназой в сравнении с хирургическими методами лечения у пациентов с тромбозом артерий нижних конечностей различной степени ишемии: Протокол многоцентрового открытого рандомизированного клинического исследования ФОРАТ // Ангиология и сосудистая хирургия. Журнал имени академика А.В. Покровского. – 2025. – Т. 31, № 2. – С. 33–41. DOI: 10.33029/1027-6661-2025-31-2-33-41

26. Константинов С.Л., Стрябкова Г.И., Басараб А.И., Кравчук В.Н., Кажанов И.В., Иванов С.В., Чефранова Ж.Ю., Маркин С.С. Неиммуногенная стафилокиназа в лечении массивной тромбоэмболии легочной артерии высокого риска в раннем послеоперационном периоде по поводу осколочного ранения бедра. Рациональная Фармакотерапия в Кардиологии. – 2023. – Т. 19, № 5. – С. 495–501. DOI: 10.20996/1819-6446-2023-2957