РАЗРАБОТКА НОРМ КАЧЕСТВА ОБРАЗЦОВ МОДЕЛЬНОГО СОСТАВА ГРАНУЛИРОВАННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ С ГЛУТАТИОНОМ ВОССТАНОВЛЕННЫМ

Биологически активные серосодержащие соединения (БАСС) проявляют ярко выраженные антиоксидантные свойства. Особое положение из числа данных соединений занимает глутатион восстановленный (GSH). Он представляет собой ключевое звено 3-х антиоксидантных систем организма из существующих четырех. Исходя из вышесказанного, нами была предложена лекарственная форма на основе GSH, обладающая антиоксидантными свойствами.

Целью данного исследования является разработка модельной гранулированной лекарственной формы на основе GSH и методики ее анализа с помощью предколоночной дериватизации ортофталевым альдегидом.

Материалы и методы. В качестве объекта исследования использовали GSH и гранулированную лекарственную форму на основе GSH, полученную методом влажного гранулирования. Оценку количественного содержания GSH вполученных гранулах, проводился с помощью предколоночной дериватизации методом обращено-фазной высокоэффективной хроматографии (ОФ ВЭЖХ). В качестве дериватизурующего агента использован орто-фталевый альдегид. Для обнаружения образовавшегося деривата был применен диодно-матричный детектор.

Результаты. В ходе работы была создана модельная лекарственная форма – гранулы на основе GSH. Исходя из рекомендаций по дозировке препарата подобрана концентрация действующего вещества. В качестве вспомогательного компонента была выбрана лактоза. Изучены физические и технологические характеристики модельного образца гранул с GSH и лактозой в качестве наполнителя. Разработана и отвалидирована методика количественного определения GSHв гранулах с использованием предколоночной дериватизации орто-фталевым альдегидом методом ВЭЖХ.

Заключение. Разработанная гранулированная лекарственная форма по анализируемым показателям соответствует требованиям, приведенным в ОФС «Гранулы». При помощи валидационной оценки установлено, что разработанная методика количественного определения GSH в гранулах является правильной, прецизионной и специфичной.

1. Winterbourn C.C. Superoxide as an intracellular radical sink // Free Radic. Biol. Med. – 1993. – Vol. 14, № 1. – P. 85–90.

2. High hepatic glutathione stores alleviate Fasinduced apoptosis in mice / S. Cazanave, A. Berson, D. Haouzi [et al.] // J Hepatol. – 2007. – Vol. 46, № 5. – P. 858–868.

3. Go Y.M., Jones D.P. Redox compartmentalization in eukaryotic cells / //Biochim Biophys Acta. – 2008. – Vol. 1780, № 11. – P. 1273–1290. DOI: 10.1016/j.bbagen.2008.01.011.

4. Glutathione binding to the Bcl-2 homology-3 domain groove: a molecular basis for Bcl-2 antioxidant function at mitochondria / A.K. Zimmermann, F.A. Loucks, E.K. Schroeder [et al.] // J. Biol. Chem. – 2007. – Vol. 282, № 40. – P. 29296–29304. DOI: 10.1074/jbc.M702853200.

5. Arnér E.S., Holmgren A. Physiological functions of thioredoxin and thioredoxin reductase // Eur J Biochem. – 2000. – Vol. 267, № 20. – P. 6102–6109. https://doi.org/10.1046/j.1432-1327.2000.01701.x

6. Iles K.E., Liu R.M. Mechanisms of glutamate cysteine ligase (GCL) induction by 4-hydroxynonenal // Free Radic. Biol Med. – 2004. – Vol. 38, № 5. – P. 547– 556. DOI: 10.1016/j.freeradbiomed.2004.11.012.

7. Corbucci G.G. The role of reduced glutathione during the course of acute haemolysis in glucose-6-phosphate dehydrogenase deficient patients: clinical and pharmacodynamic aspects // Int J Clin Pharmacol Res. – 1990. – Vol. 10, №5. – P. 305–310.

8. Голиков С.Н., Саноцкий И.В., Тиунов Л.А. Общие механизмы токсического действия. – Л.: Медицина, 1986. – 280 с.

9. Еропкин М.Ю., Еропкина Е.М. Культуры клеток как модельная система исследования токсичности и скрининга цитопротекторных препаратов. – СПб.: МОРСАР АВ, 2003. – 239 с.

10. Тиунов Л.А. Механизмы естественной детоксикации и антиоксидантной защиты // Вестник РАМН. – 1995. – №3. – С. 9–13.

11. Тиунов Л.А. Иванова В.А. Роль глутатиона в процессах детоксикации // Вестник АМН СССР. – 1988. – №1. – С. 62–69.

12. Harman D. Free-radical theory of aging: inversing the functional life span // Ann NY Acad Sci. – 2006. – Vol. 1067. – P. 10–21. DOI: 10.1196/annals.1354.003.

13. Lőrincz T., Szarka A. The determination of hepatic glutathione at tissue and subcellular level // J Pharmacol Toxicol Methods. – 2017. – Vol. 88, pt. 1. – P. 32–39. DOI: 10.1016/j.vascn.2017.05.004.

14. Kanekal S., Kehrer J.P. Metabolism of cyclophosphamide by lipoxygenases // Drug Metab Dispos. – 1994. – Vol. 22, №1. – P. 74–78.

15. Traverso N., Ricciarelli R., Marengo B, et al. Role of glutathione in cancer progression and chemoresistance // Oxidative Medicine and Cellular Longevity. – 2013. – Vol. 2013. – Article ID 972913. https://doi.org/10.1155/2013/972913.

16. Поляков Н.А., Дубинская В.А., Астраханова М.М., Быков В.А. Гидратация и термодинамические характеристики образцов альфалактозы, полученные с использованием новых технологий // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. – 2011. – №8. – С. 7–11.

17. Lenton K.J., Therriault H., Wagner J.R. Analysis of glutathione and glutathione disulfide in whole cells and mitochondria by postcolumn derivatization high-performance liquid chromatography with ortho-phthalaldehyde // Anal Biochem. – 1999. – Vol. 274, № 1. – P. 125–130. DOI: 10.1006/abio.1999.4258.

18. Общая фармакопейная статья ОФС.1.1.0012.15 «Валидация аналитических методик». – ГФ XIV. – М., 2018.

19. Руководство по валидации методик анализа лекарственных средств. Методические рекомендации. – М.: Спорт и Культура – 2000, 2007. – С. 6–92.

20. Общая фармакопейная статья ОФС.1.1.0013.15 «Статистическая обработка результатов химического эксперимента». – ГФ XIV. – М., 2018.